Vasektomi bekerja dengan memutus atau menyumbat dua saluran yang membawa sperma dari testis menuju uretra. Saluran ini disebut vas deferens. Setelah saluran tersebut ditutup, sperma tidak dapat lagi masuk ke dalam cairan semen dan keluar saat ejakulasi.
Namun, testis tetap menjalankan fungsinya untuk memproduksi sperma. Sperma yang tidak dapat melewati saluran tersebut akan tetap berada di bagian sistem reproduksi, terutama di sekitar epididimis dan bagian vas deferens yang berada sebelum titik penyumbatan.
