Dokter mungkin merekomendasikan untuk menguji kadar kortisol jika mencurigai kita mungkin memiliki produksi kortisol yang terlalu sedikit atau terlalu banyak.
Kadar kortisol dapat diukur dalam darah, urine, atau air liur. Jam berapa dokter mengambil sampel darah tergantung pada apakah dokter mengkhawatirkan terlalu banyak atau terlalu sedikit kortisol. Sampel darah dapat diambil dari pembuluh darah di lengan pada pagi hari, saat kadarnya paling tinggi, atau bisa juga diambil sekitar jam 4 sore, saat kadarnya seharusnya jauh lebih rendah.
Tes darah untuk kortisol rendah dilakukan dengan mengukur kadar dalam darah sebelum dan satu jam setelah penyuntikan obat yang disebut hormon ACTH. Pada pasien dengan kadar kortisol rendah yang disebabkan oleh penyakit Addison, kadarnya tidak akan meningkat bahkan setelah injeksi ACTH, sedangkan pada orang normal kadarnya meningkat secara signifikan.
Air liur juga dapat dikumpulkan (biasanya pada malam hari saat kadar kortisol lebih rendah). Selama tes kortisol air liur, kita akan diminta swab ke dalam mulut dan menunggu beberapa menit hingga penuh dengan air liur.
Untuk tes urine kortisol, kita mungkin diminta untuk mengumpulkan semua urine yang dihasilkan selama 24 jam dalam wadah yang disediakan oleh laboratorium. Akan tetapi, kadar kortisol urine terkadang dapat diuji dengan satu sampel urine pertama pada pagi hari.